生命經緯專題
流式細胞術(Flow Cytometry, FCM)是七十年代發展起來的高科學技術,它集計算機技術、激光技術、流體力學、細胞化學、細胞免疫學于一體, 同時具有分析和分選細胞功能。它不僅可測量細胞大小、內部顆粒的性狀,還可檢測細胞表面和細胞漿抗原、細胞內DNA、RNA含量等,在血液學、免疫學、腫瘤學、藥物學、分子生物學等學科廣泛應用。
流式細胞儀的構造與工作原理
  流式細胞儀主要由以下五部分構成:①流動室及液流驅動系統②激光光源及光束形成系統③光學系統④信號檢測與存儲、顯示、分析系統⑤細胞分選系統。
流動室及液流驅動系統
  流動室是流式細胞儀的核心部件,由石英玻璃制成。單細胞懸液在細胞流動室里被鞘流液包繞通過流動室內的一定孔徑的孔,檢測區在該孔的中心,細胞在此與激光垂直相交,在鞘流液約束下細胞成單行排列依次通過激光檢測區。[詳細]
激光光源及光束形成系統
  常用的激光管是氬離子氣體激光管,它的發射光波長488ηm,此外可配備氦氖離子氣體激光管(波長633ηm)和/或紫外激光管。在激光光源和流動室之間有兩個圓柱形透鏡,將激光光源發出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束(22μm×66μm),使通過激光檢測區的細胞受照強度一致。[詳細]
信號存儲、顯示、分析系統
   流式細胞儀的光學系統由若干組透鏡、小孔、濾光片組成,大致可分為流動室前和流動室后兩組。流動室前的光學系統由透鏡和小孔組成,透鏡和小孔的將激光光源發出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束,使通過激光檢測區的細胞受照強度一致,最大限度的減少雜散光的干擾 [詳細]
細胞分選系統
  存儲在流式細胞儀的計算機硬盤或軟盤內的數據一般是以List mode(列表排隊)方式存入的。數據的顯示和分析一般采用一維直方圖、二維點陣圖、等高線圖和密度圖。[詳細]
流式細胞儀 產品推薦
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  T細胞亞群檢測的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3;陣發性血紅蛋白尿(PNH)檢測的CD55、CD59;血小板無力癥(GT)檢測的CD41、CD61等等。[詳細]

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   臨床迫切需要快捷高效準確可靠的檢測工具用于檢測HIV感染者的免疫狀態。BD公司推出的FACSCount流式細胞儀正是為了滿足這一臨床需求而專門設計制造的。 [詳細]

流式細胞儀的應用
  流式細胞儀(FCM)是集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術發展起來的一種先進儀器,已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。
    ①細胞生物學:細胞凋亡研究;定量分析細胞周期并分選不同細胞周期時相的細胞;分析生物大分子如DNA、RNA、抗原、癌基因表達產物等物質與細胞增殖周期的關系,進行染色體核型分析,并可純化X或Y染色體。[詳細]

    ②腫瘤學:DNA倍體含量測定是鑒別良、惡性腫瘤的特異指標。近年來已應用DNA倍體測定技術,對白血病、淋巴瘤及肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多種實體瘤細胞進行探測。用單克降抗體技術清除血液中的腫瘤細胞。[詳細]

    ③免疫學:研究細胞周期或DNA倍體與細胞表面受體及抗原表達的關系;進行免疫活性細胞的分型與純化;分析淋巴細胞亞群與疾病的關系;免疫缺陷病如艾滋病的診斷;器官移植后的免疫學監測等。[詳細]

    ④血液學:血液細胞的分類、分型,造血細胞分化的研究,血細胞中各種酶的定量分析,如過氧化物酶、非特異性酯酶等;用NBT及DNA雙染色法可研究白血病細胞分化成熟與細胞增殖周期變化的關系,檢測母體血液中Rh(+)或抗D抗原陽性細胞,以了解胎兒是否可能因Rh血型不合而發生嚴重溶血;檢測血液中循環免疫復合物可以診斷自身免疫性疾病,如紅斑狼瘡等。[詳細]

    ⑤藥物學:檢測藥物在細胞中的分布,研究藥的作用機制,亦可用于篩選新藥,如化療藥物對腫瘤的凋亡機制,可通過測DNA凋亡峰,Bcl-2凋亡調節蛋白等。[詳細]
 
  流式細胞儀的應用

  流式細胞儀的應用

流式細胞儀實驗方法
   流式細胞儀技術,主要是測量群體中單個細胞經適當染色后其成分所發出的散射光和熒光,經染色的細胞在懸液中以單行流過高強度光源的焦點,當每個細胞經過焦點時,發出一束散射光/或熒光。它們經過過濾及光鏡系統收集到達一個光電檢測器(光電倍增管或一個固態裝置),光檢測器把散射光定量轉化成電信號,經數字轉換器進行數字化后而成整數,然后進行電子存儲,以后數據可以調出顯示和進行分析。
樣品制備方法
    流式細胞儀是測定一個或重復的每個顆粒經光路的信號,因此,細胞必須做成單個細胞懸浮狀態,不能聚集,也不允許有細胞碎片存在。所用染料必須特異(如特異單抗),而且不允許滲透至載液中。

    標本如果是屬于淋巴細胞等血細胞、骨髓細胞或白血病細胞系或類淋巴細胞系,要經Ficoll分離,作單細胞分離處理,但若為實體組織或貼壁生長的上皮成纖維樣細胞,需采用酶消化法(胰蛋白酶、膠原酶等),化學法(EDTA、EGTA和檸檬酸鹽)消化分散液或洗液最好用無鈣、鎂PBS,檸檬酸鹽的濃度為40μmol/L,并同時采用機械分散法……[詳細]
流式細胞術Protocol研究示例
  細胞凋亡研究:細胞凋亡是細胞在基因控制下的有序死亡,在疾病發生、發展中有重要作用,因而研究細胞凋亡有重要意義。細胞凋亡檢測方法很多,應用流式細胞儀技術可根據細胞在凋亡過程中發生一系列形態、生化變化從多個角度對細胞凋亡進行定性和定量的測定。[詳細]

   細胞分選:流式細胞儀能夠分選某一亞群細胞,分選純度>95%。目前細胞分選主要用于研究,臨床應用較少。利用流式細胞儀分選免疫擔當細胞進行細胞免疫學研究也是目前的熱門課題。流式細胞儀能夠分選出你想得到的任何一亞群細胞,只要你想得到的某一亞群細胞有合適的單克隆抗體標記。[詳細]

   細胞因子的檢測:隨著多標記及胞內細胞因子標記流式細胞技術的出現,使對細胞內細胞因子的研究推向了一個新的階段。本文主要對胞內細胞因子流式細胞技術作介紹。[詳細]

   血液學應用:本文向您介紹流式細胞儀在血液研究領域的應用,包括DNA倍體分析及細胞周期分析,淋巴細胞亞群測定,白血病免疫分型,淋巴瘤免疫分型,紅細胞疾病診斷,血小板功能分析和血小板病診斷,微小殘留白血病檢測,白細胞吞噬功能測定,NK和LAK細胞活性測定,造血干/祖細胞測定等。[詳細]

 
流式細胞儀實驗方法
  
流式細胞儀實驗方法
 
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